Eppendorf BioPhotometer - Manuel (Page 46)

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12 Exploitation des résultats et conversions
Dilution de l'échantillon, parcours optique de la cuve et correction A 320
Voir chapitre 12.1.
12.3 Protéines par ajout de réactif
Méthodes: Bradford, Bradford micro, BCA, BCA micro, Lowry, Lowry micro
Sélection de l'expression du résultat:
– Absorbance
– Calcul de la concentration par un facteur
– Calcul de la concentration par standards
Sélection des modes de calcul à partir de standards:
– Calibrage à un point
– Calibrage multi-points (droite d'étalonnage)
– Calibrage multi-points (courbe d'étalonnage)
Calcul des concentrations par un facteur et calcul de la concentration par un standard
(calibrage à un point)
Voir chapitre 12.2; longueur d'onde: 595 nm (Bradford; Lowry) ou 562 nm (BCA)
Calcul de la concentration par standards (calibrage multi-points; droite d'étalonnage)
La droite d'étalonnage sera établie à partir d'une série de standards de 2 à 10 valeurs, avec détermination
simple, double ou triple (concentration en fonction de l'absorbance). L'équation de la droite sera calculée par
une régression linéaire.
C = a
o
+ a
1
A
a
1
=Pente de la droite d'étalonnage (facteur)
a
o
= Point d'intersection de la droite d'étalonnage avec l'axe des concentrations
(concentration d'un échantillon à l'absorbance "0" [décalage])
Après calcul du calibrage un CV (coefficient de variation %) sera formé pour évaluer la dispersion des
lectures. (exception: calibrage deux points avec détermination simple des deux standards) Si le CV est
supérieur à 10 % il sera affiché. Dans ce cas, le calibrage ne sera mis en mémoire qu'après validation. Avec
plus de deux standards, la valeur du cv sera toujours affichée, même si sa valeur est < 10 %).
Les paramètres calculés "a
o
" et "a
1
" de la droite d'étalonnage pourront être imprimés à l'aide de la touche
.
Calcul de la concentration par une série standard (calibrage multi-points, courbe d'étalonnage)
Une courbe d'étalonnage (concentration en fonction de l'absorbance) sera établie à partir d'une série
de 5 à 10 standards en détermination simple, de 4 à 10 standards en détermination double ou triple.
La régression non linéaire sera calculée à partir d'un polynôme du 3è degré.
C = a
o
+ a
1
A + a
2
A 2 + a
3
A 3 + . . .
a = Coefficient (les coefficients sont déterminés à partir de la méthode des moindres carrés)
Valeur du CV: voir ci-dessus (régression linéaire)
Les différents paramètres calculés pour la courbe d'étalonnage mémorisée peuvent être imprimés à l'aide de
la touche
.
•
Function
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Function
12_Auswertg_f.fm Seite 134 Montag, 20. Februar 2006 13:26 Uhr