Eppendorf BioPhotometer - Manuel (Page 45)

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12 Exploitation des résultats et conversions
Touche "Conversion": calcul de la concentration molaire
Application: calcul des concentrations molaires à partir des concentrations massiques et de la masse molaire
relative. La masse molaire relative sera saisie directement ou sera calculée par le système à partir du nombre
de bases ou paires de bases par molécule.
C
mol
= C / N
C
mol
= concentration molaire calculée
N = masse molaire relative en kDa (saisie par la touche )
Si le nombre de base ou de paires de base est programmé à la place de la masse molaire relative, N sera
calculé à partir du nombre de bases (-paires):
ADNds: N = bp x 2 x 330 x 10 -3
ADNss, ARN;, Oligo: N = b x 330 x 10 -3
N = Masse molaire relative calculée exprimée en kDa
bp = Nombre de paires de bases programmées par molécule (ADNds)
b = Nombre de bases programmées par molécule (ADNss, ARN, Oligo)
L'unité de concentration molaire est programmée au cas par cas pour chaque méthode par la touche .
12.2 Protéines directes par photométrie
Sélection de l'expression des résultats:
– Absorbance
– Calcul de la concentration par un facteur
– Calcul de la concentration par calibrage à un point
– Calcul de la concentration par la formule de Warburg
Calcul de la concentration par un facteur
Voir chapitre 12.1; longueur d'onde de lecture: 280 nm
Lors de la programmation du facteur par la touche , il convient de tenir compter de l'unité de
concentration.
Calcul de la concentration par un standard (calibrage à un point)
F = C
s
/ A
s
F = Facteur calculé
C
s
= Concentration donnée du standard ( programmation au cas par cas par la touche selon la
méthode)
A
s
= Absorbance lue pour la standard
Si la lecture multiple du standard a été programmée (2x, 3x), le calcul du résultat se fera à partir des
absorbances lues par régression linéaire avec intégration de la valeur zéro. Après calcul de la régression un
CV (coefficient de variation en %) sera formé pour évaluer la dispersion des lectures. Si le CV est supérieur à
10 %, il sera affiché. Dans ce cas, le calibrage ne sera mis en mémoire qu'après validation. (voir chap. 12.3).
Le calcul de la concentration de l'échantillon s'effectuera à l'aide du facteur calculé:
C = A 280 x F
Calcul de la concentration par la formule de Warburg
C = 1.55 x A 280 – 0.76 x A 260 pour l'unité de concentration "mg/mL"
C = (1.55 x A 280 – 0.76 x A 260 ) x 1000 pour l'unité de concentration " µ g/mL"
Conversion
Parameter
Parameter
Parameter
12_Auswertg_f.fm Seite 133 Montag, 20. Februar 2006 13:26 Uhr