Eppendorf BioSpectrometer fluorescence - Manuel (Page 98)

Procédés d'évaluation
Eppendorf BioSpectrometer
® fluorescence
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Le coefficient d'absorbance molaire et la masse molaire relative de la protéine serviront au calcul de, 
A
0,1%
:
ε
P
= coefficient d'absorbance molaire de la protéine ; unité : cm -1 M -1 .
MM
P
= masse molaire relative de la protéine ; unité : Da (saisie dans General Method Parameter en kDa).
12.6 Procédures d'évaluation spéciales pour méthodes Dye
12.6.1 Calcul du facteur pour le colorant du coefficient d'extinction
Pour les méthodes Dye, la concentration du colorant est calculée avec un facteur issu de l'extinction
mesurée (voir Évaluation avec facteur ou standard à la page 92). Le facteur est saisi pour chaque colorant
dans la fonction
General Method Parameter/Dyes. Au lieu de saisir le facteur, il est possible de saisir le
coefficient d'extinction. Dans ce cas, le facteur est calculé de la manière suivante :
F = facteur pour le colorant ; unité : pmol/μL.
ε = coefficient d'extinction pour le colorant ; unité : cm -1 Mol -1 L.
12.6.2 Calcul de la FOI
Dans les méthodes Dye, la fréquence d'incorporation (FOI = Frequency of Incorporation) est calculée et
affichée comme valeur du rapport entre les molécules de colorant et la quantité de nucléotides dans l'acide
nucléique. Le calcul peut être sélectionné pour deux unités de résultats différentes :
Unité MOLÉCULE dye/kb
P
P
MM
A
H
% 1 . 0
Dye
Dye
F
H
6 10
NA XXX
nt
Dye
YYY
F A
MM A
FOI
u
u
u
6 10
H