Mm c c, 10 u – Eppendorf BioSpectrometer fluorescence Manuel d'utilisation
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Procédés d'évaluation
Eppendorf BioSpectrometer
®
fluorescence
Français (FR)
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Informations complémentaires sur la pureté des substances mesurées : rapport A260/A230 et rapport
A260/A230 (valeurs du rapport limitées aux acides nucléiques), spectre de longueurs d'onde
d'absorbance.
Pour le rapport A260/A230, on trouve différentes valeurs d'acide nucléique purs dans la littérature :
• ADN : 2,3 à 2,5
(The Nucleic Acids, 1955)
• ADN : 1,9
(Current Protocols in Molecular Biology, 1994)
Les valeurs varient fortement suivant le pH. C'est pourquoi, les acides nucléiques ne devraient pas être
mesurés dans l'eau, mais dans un tampon à un pH compris entre 7 et 7,2 (par ex. tampon TE).
12.5.3
Conversion en concentrations molaires et quantités d'acides nucléiques
La conversion ne peut être appliquée qu'aux acides nucléiques et aux méthodes avec colorant et acides
nucléiques comme composant de la biomolécule. Elle a lieu dans l'étape
process results/More
calculations.
12.5.3.1 Calcul de la quantité
Application : calcul de la quantité (masse) d'acide nucléique dans le volume d'échantillon total.
M = quantité totale calculée (masse) d'acide nucléique dans le récipient de réaction. Unité : μg.
C = concentration d'acide nucléique calculée à partir de la mesure. Unité : μg/mL ou ng/μL.
V
P, total
= volume total d'échantillon contenu dans le récipient de réaction. Entrez cette valeur dans
More
calculations. Unité : μL.
12.5.3.2 Calcul de la concentration molaire
Application : calcul de la concentration molaire d'acide nucléique à partir de la concentration de masse et la
masse molaire relative. La masse molaire est entrée soit directement, soit calculée par l'appareil à partir du
nombre de bases ou de paires de bases calculé par molécule d'acide nucléique.
C
mol
= concentration molaire d'acide nucléique calculée. Unité : pmol/mL.
C = concentration molaire d'acide nucléique calculée à partir de la mesure. Unité : μg/mL ou ng/μL.
MM = masse molaire relative. Unité : kDa
MM
C
C
Mol
3
10
u