Hoefer SE400 - Manuel (Page 36)

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Échantillon coloré recueille
Près du front
de tampon Gel de concentration Les molécules sont pas suffisamment limité par la taille des
pores de gel de résolution: augmenter le T%.
Dégradation Les protéines peuvent être dégradées par des protéases
endogènes: utiliser des inhibiteurs de protéase au cours de
la première étape d’isolement.
Près du sommet
du gel lorsque
le front de la
mémoire tampon
a atteint le fond Gel de concentration La taille des pores de gel est trop petit: diminuer la T% de
la résolution (ou l’empilage) de gel.
Précipitation La protéine a précipité. Chauffer l’échantillon à une
température inférieure (70 °C ou moins) pendant 1-2 min.
A la fois haut et
en bas du gel Gel de concentration La plage de poids moléculaire de l’échantillon nécessite un
gradient de concentration d’acrylamide pour régler la gamme
de tailles de protéines.
problème cause possible remède
Suivi de colorant
ne affûter dans une
zone de concentra-
tion dans le gel
d’empilement Pauvre empilage Versez un plus grand gel de stacking. (Pour de meilleurs
résultats, permettent une hauteur d’empilage-gel de 2,5 fois
la hauteur de l’échantillon dans le puits.)
Qualité réactif Éliminer des solutions d’acrylamide obsolètes et utiliser
uniquement le grade le plus élevé d’acrylamide.
La préparation des
échantillons Lors de la préparation des échantillons, évitez d’utiliser des
solutions avec des concentrations élevées de sel.