Iris Sample Processing StatSpin® CytoFuge 2 Compact Cytocentrifuge System - Manuel (Page 8)

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Section
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Préparation/caractéristiques des échantillons
Présentation
La concentration cellulaire approximative de l’échantillon doit être établie avant la préparation de la lame sur le
CytoFuge 2. Les échantillons contenant une concentration cellulaire supérieure à la quantité optimale
produiront des lames avec des cellules trop condensées ou se chevauchant. Les échantillons contenant une
concentration cellulaire trop faible produiront des lames avec des cellules difficiles à localiser, compter ou
examiner. La table suivante fournit un indice global pour la concentration d’échantillon, basé sur un diamètre
de cellule moyen de 10 µm :
Concentration de l’échantillon Recommandation
500 à 1500 cellules/µl* Utiliser un volume d’échantillon optimal
Inférieur à 500 cellules/µl Préconcentrer l’échantillon
Supérieur à 1500 cellules/µl Diluer l’échantillon
* Dans les échantillons connus pour leurs faibles populations cellulaires (FCS p. ex.), un compte de
50 à 100 cellules/µl produira des résultats acceptables.
ATTENTION – Les précautions universelles doivent être observées sur tous les échantillons, même
si l'échantillon n'est pas connu pour contenir un agent infectieux. (Voir références)
Volumes d’échantillon
Appliquer les directives suivantes pour déterminer les volumes d’échantillon dans chacun des concentrateurs
CytoFuge 2 :
Plage de volume max. Plage de volume optimal
Concentrateur filtrant 50 à 500 µl 100 à 400 µl
Concentrateur cellulaire à un
puits
300 à 1600 µl 400 à 800 µl
Concentrateur cellulaire à trois
puits
50 à 400 µl 100 à 200 µl
Préconcentration
Pour de meilleurs résultats, les échantillons au contenu cellulaire faible doivent être préconcentrés. Par
exemple, si l’échantillon initial contient environ 100 cellules/µl, une préconcentration x10 fournira une
numération de 1000 cellules/µl, soit le compte recommandé pour le CytoFuge 2.
Pour préconcentrer un échantillon,
1. Transférer 10 ml d’échantillon dans un tube de centrifugation conique en polypropylène.
2. Agiter l’échantillon entre 1000 et 1500 x g pendant 10 à 15 minutes dans une centrifugeuse
traditionnelle.
3. Décanter 9 ml de supernatant dépourvu de cellule.
4. Mélanger au vortex ou en agitant le tube le culot cellulaire et le supernatant restant.
5. Pipeter le volume approprié d’échantillon concentré vers les concentrateurs du CytoFuge.
Dilution
Pour de meilleurs résultats, diluer les échantillons présentant une densité cellulaire extrêmement élevée. On
peut utiliser comme diluant dans la plupart des applications une solution saline à tampon ou des milieux de
culture tissulaire standard (une solution saline équilibrée de Geys), avec une ou deux gouttes de sérum-
albumine bovin (SAB) pour favoriser l’adhésion des cellules à la lame du porte-objet.